甲醛残留检测方法验证方案
Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of
Formaldehyde
验证方案的审批 Review and Approve 部门/职位（Dep./Post） 化验组长 QA经理 QC经理 副总经理 签名 （Signature） 日期 （Date） 起草人 （Prepared by） 审核人 (Reviewed by) 审核人 (Reviewed by) 批准人 (Approved by) 姓名 （Name） 陈 蕊 张京伟 齐雁鸿 姚 兵 甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 2/17 验证方案修订历史 History of revision 版本号 Version NO. 00 日期 Date 修订原因 Reason 原始版本 签名 signature
甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 3/17
目 录
Index of Contents
1. 目的（OBJECTIVE） ................................................... 4 2. 范围（SCOPE） ....................................................... 4 3. 职责（RESPONSIBILITIES） ............................................ 4 4. 参考文件（REFERENCES） .............................................. 4 5. 术语与缩写（GLOSSARY AND ABBREVIATION） .............................. 4 6. 概述（SUMMARY） ..................................................... 5 7. 验证前提（QUALIFICATION PREREQUISITE） ............................... 7 8. 验证内容及接受标准（CONTENTS OF VALIDATION AND ACCEPTANCE CRITERIA） . 7 9. 偏差（DEVIATION） ................................................... 9 10. 变更及再验证（CHANGE AND REVALIDATION） .............................. 9 11. 附件（APPENDIX） ................................................... 10 附件1：培训确认报告 ................................................... 11 附件2：主要仪器设备相关信息确认报告 ................................... 12 附件3：线性和范围测试报告 .............................. 错误!未定义书签。 附件4：准确度测试报告 ................................................. 14 附件5：方法精密度测试报告 ............................................. 15 附件6：耐用性测试报告 ................................................. 16 附件17：偏差记录 ...................................................... 17
甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 4/17 1. 目的（Objective）
目前制药厂房仍普遍使用甲醛作为环境的消毒方式，但在厂房设施及设备表面的甲醛残留会对产品质量及人员安全造成危害。因此，需要有一个切实可行的方法对其残留量进行测定。通过查阅资料及反复试验，确定使用紫外分光光度法进行测定。现将该方法的验证思路及过程进行记录，以证明方法的可行性。 2. 范围（Scope）
该方法适用于本公司洁净区甲醛残留量的测定。 3. 职责（Responsibilities） 3.1 质量检验部
3.1.1起草、审核并批准验证方案。
3.1.2按照方案执行验证，并整理收集验证数据。 3.1.3编制、审核并批准验证报告。 3.2质量保证部
3.2.1审核验证方案和验证报告 3.3计量中心
3.3.1建立仪器、仪表校准程序和时间表。 3.3.2负责仪器仪表的日常维护。 3.4主管质量领导
3.4.1负责批准验证方案和报告。 4. 参考文件（References） 本验证方案参考文件如下： ✓ 药品生产验证指南2003版
5. 术语与缩写（Glossary and Abbreviation）
本方案涉及术语：
线性（Linearity）：系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比
审核人 Reviewed by QA陈蕊 签名/日期 Signature/Date 审核人 Reviewed by QA杨宁波 签名/日期 Signature/Date 甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 5/17 关系的程度。
准确度（Accuracy）：系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（％）表示。
精密度（Precision）：系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 耐用性（Robustness）：是指在测定条件有小的波动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法可用于提供常规检验依据。开始研究分析方法时，就应考虑其耐受性。如测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。
6. 概述（Summary） 6.1方法描述
AHMT在碱性条件下，与甲醛发生缩合反应生成产物II和一分子水；之后再用高碘酸钠进行氧化脱氢，生成6-巯基-5-三氮杂茂（4,3-b）-S-四氮杂苯。该物质为紫红色化合物，可以用于分光光度法的定量检测。 6.1.1.仪器与材料
仪器型号 波长准确度 SHIMADZU UV2450±0.1nm 可见紫外分光光度计 6.1.2.试剂和试液 试剂名称 甲醛 氢氧化钠 AHMT 高碘酸钠
审核人 Reviewed by QA陈蕊 检测波长 550nm 比色皿宽度 5cm 生产厂家 批号 有效期至 签名/日期 Signature/Date 审核人 Reviewed by QA杨宁波 签名/日期 Signature/Date 甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 6/17 6.1.2.1 甲醛稀释液的制备：
精密量取分析纯甲醛溶液5ml至1000ml容量瓶中，用纯化水稀释至刻度后摇匀，配制成甲醛稀溶液。
6.1.2.2 甲醛稀释液的标定：精密量取甲醛稀溶液10ml，精确加入0.1mol/L碘液50ml，1mol/L氢氧化锂20ml。避光放置15min，加10%硫酸15ml，用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定至终点。
6.1.2.3空白对照的滴定：精密量取纯化水10ml，重复上述步骤，作为空白进行对照。 6.1.2.4 甲醛浓度计算：
甲醛稀释液中甲醛浓度（mg/ml)(VaVb)1.501310Va甲醛稀释液消耗0.1mol/L硫代硫酸钠液量（ml）Vb空白试验消耗0.1mol/L硫代硫酸钠液量（ml）1.50131ml碘液（0.1mol/L）相对甲醛的量（mg）10甲醛稀释液取样量（ml）
6.1.3 甲醛标准液的制备：精密量取5mL甲醛稀释液至200ml容量瓶中，加纯化水稀释定容，振摇均匀，从中精密量取5ml至250ml容量瓶中，用纯化水稀释定容，振摇均匀
6.1.4 AHMT试液的制备：称取AHMT 0.5g，加0.2mol/L盐酸使溶解成100mL，避光保存。
6.1.5 5mol/L氢氧化钠试液的制备：称取200g氢氧化钠，加纯化水使溶解成1000mL至，即可。
6.1.6 0.1mol/L高碘酸钠试液的制备：称取2.14g高碘酸钠，加纯化水使溶解成100ml，即可。
审核人 Reviewed by QA陈蕊 签名/日期 Signature/Date 审核人 Reviewed by QA杨宁波 签名/日期 Signature/Date 甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 7/17 7. 验证前提（Qualification Prerequisite） 7.1人员确认
本验证小组所有成员在验证之前应接受相关的培训，如验证方案、检验操作SOP等，并有记录。培训记录见附件1。
姓名 齐雁鸿 孙新蕊
7.2仪器确认
进行分析方法验证之前，相关检测设备应经过确认，见附件2。
8. 验证内容及接受标准（Contents of Validation and Acceptance Criteria）
8.1. 线性 8.1.1.测试方法
8.1.1.1 取编号1-5的比色管5支，分别加入5mol/L氢氧化钠溶液2ml，及AHMT试液2ml。
8.1.1.2 分别取甲醛标准液0.0、0.5、1.0、1.5和2.0mL于上述比色管中，并分别加纯化水稀释成2ml（如标准液为2.0ml，可不再进行稀释），移取、稀释过程注意及时盖盖。加入后轻摇混匀。于室温下放置20min。之后分别加入0.1mol/L高碘酸钠试液2ml，摇2-5min至无气流生成为止。
审核人 Reviewed by QA陈蕊 在验证小组中职务 组长 组员 组员 组员 职责 组织实施验证工作，并对方案和报告进行审核 按验证方案开展验证实验，并完成报告 按验证方案开展验证实验，并完成报告 按验证方案开展验证实验，并完成报告 签名/日期 Signature/Date 审核人 Reviewed by QA杨宁波 签名/日期 Signature/Date 甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 8/17 8.1.1.3将制得的供试品在波长550nm处，用5cm比色皿以1号管内溶液为空白进行自动校准后依次测定2~5号管的吸光度。
8.1.1.4 以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线，求出相关系数。 8.1.2接受标准：相关系数r≥0.99。 8.1.3测试结果 见附件3 8.2.准确度试验 8.2.1测试方法
8.2.1.1以0.45ppm浓度的甲醛溶液为对照品溶液，分别配制0.36ppm、0.45ppm、0.54ppm甲醛溶液各3份。
8.2.1.2空白溶液制备：在比色管种中依次加入5mol/L氢氧化钠2ml、 AHMT试液2ml及纯化水2ml。轻摇混匀后于室温下放置20min。之后分别加入0.1mol/L高碘酸钠试剂2ml，摇2-5min至无气流生成为止，以此作空白溶液。
8.2.1.2供试品溶液制备：在比色管种中依次加入5mol/L氢氧化钠2ml、 AHMT试液2ml、0.36ppm甲醛溶液1.0mL及纯化水1ml。轻摇混匀后于室温下放置20min。之后分别加入0.1mol/L高碘酸钠试剂2ml，摇2-5min至无气流生成为止。
8.2.1.3结果测定：在550nm处，以空白溶液将可见紫外分光光度计进行自动校准后，测量供试
品溶液的浓度。
8.2.1.4同法测定0.45ppm、0.54ppm甲醛溶液的实际检测浓度。记录结果，计算回收率。
8.2.2接受标准：80%～120%。 8.2.3测试结果 见附件5 8.3精密度试验 8.3.1方法精密度
审核人 Reviewed by QA陈蕊 签名/日期 Signature/Date 审核人 Reviewed by QA杨宁波 签名/日期 Signature/Date 甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 9/17 8.3.1.1配制6份0.36ppm的甲醛溶液，按8.2.1.1~8.2.1.3的方法检测其浓度，计算6次结果的RSD值。
8.3.1.2接受标准RSD≤10%。 8.3.1.3测试结果 见附件6.
8.4耐用性
8.4.1.供试品溶液稳定性试验 8.4.1.1测试方法
按8.1.1.1~8.1.1.4的方法分别配制5支1.0mL甲醛标准液稀释至2.0mL的待测样品，将制备的待测样品放置于室温下，每支样品的放置时间分别为0min、10min、20min、30min、40min，放置结束后加入0.1mol/L高碘酸钠试剂2ml，在同样波长下分别检测其浓度,确定供试品反应时间； 8.4.1.2接受标准≤10.0%。 8.4.1.3 测试结果 见附件7
9. 偏差（Deviation）
验证执行过程中所有偏差均要进行记录，并分析原因和采取适当的措施；偏差记录见附件12。
10. 变更及再验证（Change and Revalidation）
在不发生变更的情况下，不对分析方法定期再验证；当发生以下变更时，需要再验证：
a、 样品生产工艺变更； b、 原分析方法改变；
审核人 Reviewed by QA陈蕊 签名/日期 Signature/Date 审核人 Reviewed by QA杨宁波 签名/日期 Signature/Date 甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 10/17 11. 附件（Appendix）
在测试报告中记录所有附在本方案中的文件；
附件清单
附件 1 2 3 4 5 6 7 名称 培训确认报告 仪器设备确认报告 线性和范围测试报告 准确度测试报告 精密度测试报告 耐用性测试报告 偏差记录
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培训确认报告
姓名 验证职责 组织实施验证齐雁鸿 方案并完成验证报告 孙新蕊 实施验证 实施验证 实施验证 QA QA QA 确认内容 该验证所有参与成员均经过了验证方案的培训 该验证所有参与成员均经过了相关仪器设备使用及安全培训 备注： 确认人： 日期： □ 是 □ 否 □ 是 □ 否 QC 部门 是否经过培训 签名 日期
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附件2：主要仪器设备相关信息确认报告
序号 1 仪器设备名称 分光光度计 型号 UV-2450 确认内容 使用到的主要仪器设备均经过校验，并在有效期之内 备注： 确认人： 日期： □ 是 □ 否 编号 A10834033090CS 精度 有效期至 2012-10-11
审核人 Reviewed by QA陈蕊 签名/日期 Signature/Date 审核人 Reviewed by QA杨宁波 签名/日期 Signature/Date 甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd. 文件编号Document No： VP/106/10411001 页码Page 13/17 附件4：线性测试报告
实验条件 紫外分光光度计 实验结果 序号 1 2 3 4 5 0 0.226 0.452 0.679 0.901 回归方程 相关系数 标准 结论 实验人 复核人 日期 日期 浓度（ppm） 0 0.252 0.475 0.714 0.946 Y=0.9791x-0.0097 0.9995 r≥0.99 吸光度 有效期至
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实验条件 分光光度计编号 有效期至 实验结果 配制浓度（ppm） 0.36 供试品1 0.36 0.36 0.45 供试品2 0.45 0.45 0.54 供试品3 0.54 0.54 平均回收率 标准 结论 实验人 复核人 99.22 80-120% 日期 日期 检测浓度（ppm） 0.353 0.350 0.344 0.444 0.450 0.440 0.551 0.555 0.545 回收率（%） 98.05 97.22 95.56 98.67 100 97.78 102.04 102.78 100.93
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实验条件 分光光度计编号 有效期至 实验结果 检测次数 1 2 3 4 5 6 RSD 标准 结论 实验人 复核人 吸光度 甲醛浓度(ppm) 0.363 0.356 0.351 0.362 0.359 0.352 10.0% 日期 日期 0.381 0.374 0.369 0.38 0.377 0.369
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审核人 Reviewed by QA陈蕊 签名/日期 Signature/Date 审核人 Reviewed by QA杨宁波 签名/日期 Signature/Date 甲醛残留检测方法验证方案 Validation Protocol for Residue Analytical Test Method of Formaldehyde 文件编号Document No：VP/QC/10001/00 页码Page 17/17 石药集团河北中润制药有限公司 CSPC Hebei Zhongrun Pharmaceutical Co., Ltd 附件12：偏差记录
序号 偏差内容 一般/关键 原因分析 采取措施 备注
审核人 Reviewed by QA陈蕊 签名/日期 Signature/Date 审核人 Reviewed by QA 杨宁波 签名/日期 Signature/Date
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