反相高效液相色谱法测定芦丁中槲皮素的含量

尹丽平

【摘 要】[目的]建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定芦丁中槲皮素含量的方法.[方法]用C(18)(250 mm × 4.6 mm)色谱柱,流动相为水-乙腈-冰乙酸

(1060:350:45,V:V:V),流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm.[结果]采用水-乙腈-冰乙酸系统为流动相,分离效果好,峰型好,分离时间短,计算结果准确;以甲醇为溶媒提取时间短,提取杂质少.槲皮素含量在4-12 mg/L范围内呈良好的线性关系,回归方程Y=1285X+3645,平均回收率为99%.所测样品芦丁中槲皮素的含量平均为0.813g/ml.[结论]采用RP-HPLC测定芦丁中槲皮素含量简便、灵敏、准确、重复性好,可作为质量和生产控制的有效方法.%[Objective] The main biological traits of three species of mushroom(Pleurotus ostreatus) : Pinggu, Jigu and Xiuzhengu, were fu-ture understand. [ Method] The yield, the biological efficiency, the morphologic character of fruiting body, the spore print, shape and size of spore of three species of mushrooms were compared and analyzed. [ Result] The yield and biological efficiency of three species of mushrooms was Pinggu > Jigu > Xiuzhengu and also the length and diameter of stem was Pinggu > Jigu > Xiuzhengu. There were some differences in the color spore print and class and the shape and size of spore of three species of mushrooms, which was obvious. [ Conclusion ] Pinggu, Jigu, Xiuzhengu were the allied species of Pleurotus. In general, the body of individual Pinggu was largest with higher yield; the body of Jigu was middle size with the highest price in the products of Pleurotus, which economic benefit was the most significant and the size of Xiuzhengu

was delicate and precious with the crab flavor, which was a the best variety in Pleurotus.

【期刊名称】《安徽农业科学》 【年(卷),期】2011(039)016 【总页数】2页(P9588-9589)

【关键词】反相高效液相色谱法;芦丁;槲皮素;含量 【作 者】尹丽平

【作者单位】青岛盛瑞德实业有限公司,山东,青岛,266100 【正文语种】中 文 【中图分类】S567

芦丁又叫芸香苷、维生素P或紫槲皮甙，是从荞麦或别的植物中得来的无臭无味、淡黄色至淡黄绿色结晶性粉末，在185～192℃树脂化，约215℃分解。芦丁具有抗炎作用和维生素P样作用，具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性等作用，对脂肪浸润的肝有祛脂作用，与谷胱甘酞合用祛脂效果更明显[1]。芦丁的主要成分是槲皮素。为了对该制剂的质量进行考查，笔者研究了芦丁中槲皮素测定方法。文献报道的芦丁中槲皮素含量测定方法有高效液相色谱法(HPLC)[2]、荧光光度法[3-4]、紫外可见分光光度法[5]、卡尔曼滤波光度法[6]和毛细管电泳法[7]等。笔者采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定芦丁中槲皮素的含量，旨在为芦丁的科学利用提供参考。 1 材料与方法

1.1 仪器与试药 日本岛津高效液相色谱仪(上海科学器材纯水器)。槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所)，以HPLC进行纯度检查为99.5%，乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。 1.2 方法

1.2.1 色谱条件。色谱柱:岛津用C18(250 mm×4.6 mm)色谱柱，流动相为水 - 乙腈 - 冰乙酸(1 060∶350∶45，V∶V∶V)，流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm。

1.2.2 溶液的配制。

1.2.2.1 对照品溶液。称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每50 ml含槲皮素12.5 mg的对照品溶液。

1.2.2.2 样品溶液。取样品44 mg，精密称定，以甲醇溶解，并定量转移至50 ml量瓶中，定容摇匀即得。 2 结果与分析

2.1 流动相的选择 曾采用甲醇-乙腈系统为流动相，槲皮素峰较宽，且与邻峰分离度达不到要求;后用改进甲醇-0.005%柠檬酸系统，分离度达到要求，但分离时间较长，峰型宽，影响测定结果;最后采用水-乙腈-冰乙酸系统，分离效果好，峰型好，分离时间短，计算结果准确。其分离结果见图 1、2。

图1 产品分离检测结果Fig.1 Products separation and detection results 图2 标准品分离检测结果Fig.2 Standard substance separation and detection results

2.2 提取溶剂的选择 分别用乙醚、无水乙醇、甲醇为溶媒提取，结果表明，以甲醇为溶媒提取时间短，提取杂质少。

2.3 检测波长的确定 用UV检测器分析了槲皮素对照品色谱峰和样品中所测定成分相应色谱峰的紫外光谱，结果两者的紫外光谱基本一致，槲皮素在(259±1)nm有

最大吸收。

2.4 线性关系考察 取对照品溶液，分别进样，按试验色谱条件测定峰面积，以对照品溶液进样量X为横坐标，峰面积的积分值为纵坐标，绘制的标准曲线见图3。结果表明，槲皮素含量在4～12 g/ml范围内具有良好的线性关系。 图3 槲皮素含量标准曲线Fig.3 Standard curve of quercetin content

2.5 稳定性试验 取样溶液，分别在制备后0、3、6、9、12、18、24、36个月按试验色谱条件测定峰面积，结果表明，溶液在3年内基本稳定。

2.6 重复性试验 取同一批芦丁的对照品溶液5份，分别精密称定，按试验色谱条件测定峰面积，结果相对标准偏差＜2.0。

2.7 样品测定 分别对样品进行测定，结果表明，1、2、3号样品芦丁中槲皮素的含量分别为0.813、0.812、0.814 g/ml，平均为0.813 g/ml。 3 结论

提取溶剂选择甲醇为溶媒，提取时间短，提取杂质少。用C18(250 mm×4.6 mm)色谱柱，流动相为水-乙腈-冰乙酸(1 060∶350∶45，V∶V∶V)，流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm。结果槲皮素在4～12 mg/L范围内呈良好的线性关系，回归方程Y=1 285X+3 645，平均回收率为99%。该法简便，灵敏、准确，重复性好，阴性样品对测定无干扰，可作为质量和生产控制的有效方法。 参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社，2005. [2]王晖，刘良玉，王林江.HPLC法测定透骨草中槲皮素的含量[J].江西中医学院学报，2005，17(4):41.

[3]佘琳.黄春霞.榭皮素-铝(3)-TWEEN-80荧光体系的研究及其应用[J].广东工业大学学报，2001，18(2):81-84.

[4]佘琳.陈梅.榭皮素-锡(1V)荧光光度法的研究及应用[J].分析试验室，2000，

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[5]李梅.紫外分光光度法测定复方胶囊中银杏叶总黄酮含量[J].中国医院药学杂志，1998，18(2):85.

[6]王丽琴，党高潮，顾莹.卡尔曼滤波光度法同时测定槐米中芦丁和槲皮素[J].药物分析杂志，2000，20(1):60.

[7]李向军，张裕平，袁倬斌.毛细管电泳法分离测定芦丁、枷皮素和连翘苷[J].分析试验室，2003，22(2):39-41.